作者：王梦梦; 张旭霞; 尹俊; 任湘祎; 李欣悦; ...铀螯合剂去铁转铁蛋白竞争酶联免疫吸附实验筛选方法
摘要：血液中的铀[U(Ⅵ)]与去铁转铁蛋白(apotransferrin,apo-Tf)形成稳定的络合物在U(Ⅵ)进入细胞致细胞毒性中发挥重要作用。本研究通过探讨螯合剂与apo-Tf竞争结合U(Ⅵ)的作用,建立了一种基于酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的U(Ⅵ)促排螯合剂体外筛选新模型,通过方法学研究确定了该检测方法的最佳包被抗原apo-Tf、Tf抗体、二抗稀释比例和U(Ⅵ)处理的浓度,验证了该方法的稳定性和重现性,并采用该模型考察了4种螯合剂邻苯二酚-3,6二甲撑亚氨基四乙酸(CBMIDA)、Tiron、DTPA-CaNa3、DTPA-ZnNa3与apo-Tf竞争结合U(Ⅵ)的能力,其强弱顺序为:CBMIDA≈Tiron>apo-Tf>DTPA-CaNa3≈DTPA-ZnNa3;采用动物实验观察以上螯合剂的排U(Ⅵ)效果发现,CBMIDA和Tiron立即给药能显著提高U(Ⅵ)内污染小鼠24 h尿U(Ⅵ)排出、明显降低肾脏和股骨U(Ⅵ)蓄积;而DTPA-CaNa3和DTPA-ZnNa3则无明显促排效果,与竞争ELISA法的检测结果相一致。动物实验符合复旦大学药学院动物伦理委员会规程。以上结果表明,该方法快速、简便、重现性好,能够用于U(Ⅵ)促排螯合剂的快速筛选。
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