作者：王禹璇; 刘海英; 姚红; 张华凤; 薛慧清黄芪蛋白程序性细胞死亡rna测序p53rip1
摘要：本文考察了黄芪蛋白对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用,结合转录组学探讨黄芪蛋白抗肿瘤作用机制。黄芪干燥根部经硫酸铵沉淀,得到分子质量大小不一的黄芪蛋白(Huang Qi protein,HQP)。通过血球计数法检测黄芪蛋白对肿瘤细胞HepG2的影响及其毒性作用;结合流式细胞术和Hoechst/propidium iodide(PI)双染测定细胞死亡情况;Western blot测定坏死标志蛋白受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶1(RIP1);将对照组与加药组RNA进行转录组测序,对RNA测序(RNA-seq)结果进行差异表达基因分析;qRT-PCR验证候选基因mRNA相对表达量。结果表明,随着HQP浓度增加,对肝癌细胞HepG2增殖抑制作用愈加明显,当HQP质量浓度为100μg·mL^-1时,细胞坏死率增加到18.78%,同时在显微镜下观察到PI单染的红色坏死细胞增多,Western blot结果显示RIP1蛋白水平增加。RNA-seq结果分析得到2.6万个相关基因受HQP调控,其中979个基因受调控较明显。KEGG分析发现部分差异表达基因与p53信号通路相关,qRT-PCR验证测序结果可靠。黄芪蛋白使HepG2细胞发生程序性坏死可能与p53信号通路有关。
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