作者：王延国; 宫庆娜; 杨延霞; 王军; 周忠水骨肉瘤二甲双胍线粒体介导细胞凋亡裸鼠
摘要：目的:探讨二甲双胍对人骨肉瘤U2OS及143B细胞增殖、凋亡及裸鼠皮下瘤的影响及其机制。方法:MTT法(MTT比色法)检测二甲双胍对骨肉瘤细胞生长增殖的影响;Hoechst33342染色观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin V/PI双染经流式细胞仪检测骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期运转的影响;Western blot(免疫印迹试验)检测凋亡通路相关蛋白的影响。建立裸鼠荷骨肉瘤动物模型,观察对骨肉瘤细胞体内增殖的影响。结果:50mM浓度的二甲双胍分别作用于143B细胞24、48及72h以后,细胞存活率分别为45.73%、35.16%及28.42%。二甲双胍处理的骨肉瘤细胞呈现明显强于对照组的颗粒状蓝色荧光,核皱缩、核碎裂、染色质边集并可见凋亡小体。20mM浓度二甲双胍处理后,U2OS、143B细胞的凋亡率分别30.31%、26.18%。U2OS细胞阻滞于S期,143B细胞阻滞于细胞周期G0/G1期。Westem blot法示随着二甲双胍浓度增加抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl等水平明显下降,促凋亡分子如Bax等水平明显增加,线粒体中Cyt C也逐渐释放到细胞质中。有效剂量的二甲双胍联合顺铂裸鼠体内可抑制143B皮下瘤的生长增殖,抑制率为67.1%,未能观察到二甲双胍组可以有效抑制其脏器转移的发生。结论:二甲双胍主要是通过线粒体介导的细胞凋亡通路来诱导人骨肉瘤细胞U2OS和143B细胞发生凋亡的。
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