作者：张凤英 夏天 赵丽颖 宋文嘉 李爽环磷酰胺卵巢储备力抗苗勒激素
摘要：目的研究抗苗勒激素（AMH）和生长分化因子-9（GDF-9）对环磷酰胺（Cy）降低卵巢储备力机制中的作用。方法成年雌性SD大鼠25只,取双侧卵巢组织,并切制成500μm厚的卵巢片,将卵巢片分为7组：空白组、Cy组、Cy＋卵泡刺激素（FSH）组、Cy＋AMH组、Cy＋GDF-9组、Cy＋FSH＋AMH组、Cy＋FSH＋GDF-9组,放入含DMEM-F12培养液的培养皿中分别培养2 d或4 d。除空白组外,其余各组于培养液中分别添加Cy 100 ng/mL、FSH 10 mIU/mL、AMH 100ng/mL、GDF-9 100 ng/mL。利用双抗体夹心酶联免疫吸附技术（ELISA）检测雌二醇（E2）、抑制素B（INHB）的量;光镜下计数始基卵泡（PMF）及闭锁卵泡;运用DNA缺口原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果①与空白组相比,Cy组PMF数目明显降低,闭锁卵泡明显增多;Cy＋AMH组及Cy＋FSH＋AMH组PMF数目明显多于除空白组之外的其他各组。各组培养4 d较培养2 d始基卵泡数目明显降低,闭锁卵泡数目明显增多。②与空白组相比,Cy组培养2 d和4 d时E2及INHB水平明显降低;与Cy组相比,培养2 d和4 d时Cy＋FSH组、Cy＋GDF-9组及Cy＋FSH＋GDF-9组E2、INHB明显升高。与Cy组相比,培养2 d和4 d时Cy＋AMH组及Cy＋FSH＋AMH组E2明显升高。培养4 d时Cy＋AMH组、Cy＋FSH＋AMH组INHB水平明显升高。③Cy组与空白组比较,凋亡细胞明显增多;Cy＋FSH组、Cy＋GDF-9组与Cy组相比,凋亡细胞的数量并没有显著减少。Cy＋AMH组、Cy＋FSH＋AMH组与Cy组相比凋亡细胞的数量显著减少。结论Cy可加速PMF的募集与耗竭,从而使卵巢储备力降低乃至衰竭。FSH及GDF-9可加速PMF的募集与发育,使更多的PMF进入生长卵泡阶段而受到Cy细胞毒的损害,以致PMF库存逐渐耗竭;AMH可抑制PMF的募集与发育,从而减缓Cy对PMF的加速募集与耗竭,起到保护卵巢储备力的作用。
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