作者：张迪; 惠希武; 曹卫荣; 盖文丽; 李银贵微生物谷氨酰胺转氨酶聚乙二醇化蛋白类药物聚乙二醇重组人干扰素定点偶联残留量检测方法学验证酶联免疫吸附测定法
摘要：目的：建立微生物谷氨酰胺转氨酶（microbial transglutaminase,MTGase）残留量检测的酶联免疫吸附法（ELISA法）,并进行方法学验证,用于MTGase催化偶联的生物制品的质量控制。方法：利用MTGase单抗和MTGase兔多抗,建立了MTGase的双抗体夹心ELISA方法,并验证了该方法的定量限、精密度和准确度、稀释可靠性、稳定性和专属性等,对3批PEG-IFNα2a原液进行重复测定。结果：该方法的定量限为0.165~10 ng·mL^-1,在0.05~40 ng·mL^-1范围内拟合度高,R^2〉0.99,板内和板间精密度和准确度均在（±）15%以内;样品经不同倍数稀释后,回归计算样品的准确度在±15%以内,精密度小于15%;样品室温放置2 h或冻融1次和3次,结果显示质控样品采用该方法检测的精密度均小于15%,回收率为80%~120%;应用该方法在不同稀释倍数的PEG-IFNα2a原液中等量添加5 ng·mL^-1质控样品,结果显示加标样品回收率为97.7%~101.1%。3批PEG-IFNα2a原液MTGase残留量重复测定的板内和板间精密度均在15%以内,MTGase的残留量均低于总蛋白含量的0.01%。结论：ELISA法可用于生物制品中MTGase残留量的检定。
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