作者：蒙超龙; 王祥; 段建民; 李洪涛; 吕道志人牙周膜干细胞增殖成骨分化
摘要：目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）的增殖及成骨分化的影响。方法：有限稀释法分离培养hPDLSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物表达后,分别用0.1、1、10、50 ng/mL的TNF-α作用于hPDLSCs,CCK-8法检测细胞的增殖活性。取第3代hPDLSCs,并分别在0、0.1、10 ng/mL TNF-α的作用下进行成骨诱导7、21 d,用Real-time PCR检测hPDLSCs中Runx2、Osterix、OPN及BSP的表达量,对成骨诱导21 d后的各组细胞进行茜素红染色,观察钙化结节形成情况。结果：培养的hPDLSCs高表达CD105（96.6%）、CD90（97.1%）,低表达CD34（1.89%）、CD45（1.65%）。0.1、1、10 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1、2、3 d,细胞增殖活性与对照组相比均无显著差异（P〈0.05）,而50 ng/mL TNF-α作用于hPDLSCs 1-3 d时的细胞增殖活性均降低（P〈0.05）。成骨诱导7 d后,0.1 ng/mL TNF-α组hPDLSCs中Runx2及Osterix的表达水平均高于对照组（P〈0.05）,而10 ng/mL TNF-α组的Runx2、Osterix表达量均低于对照组（P〈0.05）。成骨诱导21 d后,0.1 ng/mL TNF-α组中的Runx2、Osterix、OPN、BSP表达量均高于对照组（P〈0.05）,而10 ng/mL TNF-α组中各成骨基因的表达量均较对照组降低（P〈0.05）;0.1 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量多于对照组,而10 ng/mL TNF-α组的钙结节形成量少于对照组。结论：高浓度TNF-α可抑制hPDLSCs增殖,低剂量TNF-α可促进hPDLSCs向成骨细胞分化。
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