作者：罗岸; 左紫怡; 焦雄; 刘夏烟草合子基因克隆生物信息学分析基因表达活性检测
摘要：通过分析烟草Nicotiana tabacum长形合子和卵细胞的cDNA差减文库,获得一条合子时期表达的基因NtZE1的EST序列。分析显示,EST序列中含有315bp编码序列,通过RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)成功克隆到该序列。生物信息学分析显示,NtZE1基因编码105个氨基酸残基;NtZE1蛋白为不稳定的亲水性蛋白,具有信号肽;蛋白二级结构多为α-螺旋,软件预测该蛋白可能定位于细胞外。利用Genome walking技术获得ATG起始密码子前共2578bp的5’侧翼序列(启动子和5’UTR),将该序列连入EGFP核定位载体中并通过瞬时表达技术使其在小叶烟草N.benthamiana叶表皮细胞中表达,有明显的绿色荧光,证实所获得的5’侧翼序列具有启动基因表达的活性。
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