作者：朱勤 孙晓梅 胡敏 刘海 胡竹林离心沉淀法角膜内皮移植恒河猴
摘要：目的分析利用离心沉淀法移植体外培养的恒河猴血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VEC）替代角膜内皮细胞（corneal endothelial cells，CEC）的可行性。方法将恒河猴9只随机分为2组：实验组（6只）、对照组（3只）。实验组：角膜环钻取下中央角膜组织，显微镜下撕除后弹力层，将角膜植片形成约45°倾斜、内表面向上方置于0．6mL EP管中，再向管中加入配置好的密度为40×10^6L^-1的恒河猴VEC悬液0．5mL，管中形成棉球在下、角膜植片在中间、细胞悬液在上面的三明治结构，盖紧EP管，放置于离心机中，以400r·min^-1、800r·min^-1、1200r·min^-1的转速各离心4min后将植片原位缝回植床；对照组：将撕除后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床。术后1个月、2个月、3个月分别摘取术眼，行扫描电镜观察移植的VEC在角膜植片内表面的分布情况。结果离心沉淀后倒置显微镜观察，可见移植的类圆形细胞均匀贴附于角膜植片内表面；术后1个月扫描电镜显示种植的VEC贴附于角膜内表面，细胞表面积较大，呈长梭形，细胞间连接不紧密，可见细胞间隙及少量裸露的胶原纤维区；随着时间推移，术后2个月时，可见植片内表面的VEC密度逐渐增大，细胞间出现紧密连接；术后3个月时，可见细胞密度进一步增大，大片状均匀贴附于角膜植片内表面，细胞呈不规则多边形，高倍镜下，细胞表面可见典型的长短不一微绒毛。对照组未见纤维裸露区，胶原前表面偶见白细胞及变形红细胞。结论离心沉淀法可以将VEC成功移植于角膜内表面并均匀分布，移植后的VEC可异位生长并大量分裂增殖。
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