作者：张伟 杨为中 金敏 高宗银 陈晓燕 许艳丽 ...平板离心法人角膜上皮细胞角膜缘干细胞
摘要：目的用平板离心法建立一种新的角膜缘干细胞分选方法。方法用人角膜缘组织块培养法培养出角膜上皮细胞,收获细胞后用转速1400r·min-1和1800r·min-1分别将细胞用平板离心法于未包被的六孔板上进行分选。ATC1为1400r·min-1贴壁的细胞,ATC2为1800r·min-1贴壁的细胞,NAC为1800r·min-1离心力作用下漂浮而不能贴壁的细胞。分选出的三群细胞采用免疫组织化学、克隆形成实验、Ki67流式细胞仪进行分析。结果细胞计数显示用转速1400r·min-1筛选出的ATC1占总体细胞量的（11.32±2.46）%。在离心速度为1800r·min-1时,筛选出ATC2为（18.55±2.79）%,而NAC则为（68.29±4.07）%。ATC1表达角膜缘干细胞标志ABCG2、p63,而不表达角膜上皮细胞分化标志K3。ATC2较少表达ABCG2和p63,大部分表达K3。NAC则不表达ABCG2、p63,而几乎完全表达K3。在这三群细胞中ATC1细胞群具有最强的细胞增殖活性,其克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为（3.90±0.17）%和（56.78±2.39）%。ATC2克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为（2.48±0.19）%和（9.67±1.88）%。NAC克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为（0.84±0.89）%和（4.76±0.57）%。结论平板离心法是一种新的角膜缘干细胞的分选方法。ATC1、ATC2和NAC可能分别为角膜缘干细胞、短暂扩充细胞和终末分化细胞。
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