作者：钟刘学颖 刘小伟 戴荣平 秦梅 董方田 李...吸脂术人脂肪组织来源的干细胞角膜上皮样细胞表皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子体外诱导
摘要：目的初步探讨人脂肪组织来源的干细胞（human adipose-derived stem cells,hADSC）体外诱导为角膜上皮样细胞的分化潜能。方法分离、纯化、体外扩增hADSC,流式细胞术鉴定所获得细胞的CD29^＋、CD34^-、CD49d^＋、CD105^＋、CD106^-的表达情况。成脂、成骨诱导鉴定其多向分化潜能。在DMEM/F12体系、KM体系及上述二者等体积混合的KM/DMEM/F12体系内添加不同梯度浓度的生长因子对hADSC进行体外诱导：0μg·L^-1、10μg·L^-1、20μg·L^-1、30μg·L^-1、40μg·L^-1、50μg·L^-1的表皮生长因子（epidermalgrowthfactor,EGF）,及50μg·L^-1EGF＋10μg·L^-1碱性成纤维细胞生长因子（basicfibro blast growth factor,bFGF）和50μg·L^-1EGF＋20μg·L^-1bFGF。连续诱导21d,观察hADSC形态学的改变及第21天时角膜特异性蛋白AE5（CK3/CK12）的免疫化学表达情况,比较不同培养体系及不同浓度生长因子对hADSC诱导作用的差异。结果流式细胞仪测定传3-5代的细胞CD34^-、CD106^-、CD29^＋、CD49d^＋、CD105^＋。成脂、成骨体外诱导14d后,油红O、碱性磷酸酶染色阳性率分别为74.6%和29.3%。KM体系中加入终浓度为0～50μg·L^-1EGF诱导21d后,hADSCAE5阳性细胞率均占90%以上。其中,40μg·L^-1EGF诱导下的AE5阳性细胞率为98.7%,50μg·L^-1EGF可达到100%。而加入bFGF的hADSC则为AE5弱阳性。而另2个体系对各浓度EGF、bFGF诱导的hADSC的作用均为阴性。结论人吸脂术废弃液中可获得大量高纯度脂肪组织来源的干细胞,经体外条件诱导具备向角膜上皮样细胞分化潜能。添加EGF的角质细胞培养液有利于其分化,并具有浓度依赖性,bFGF则对分化有抑制性作用。
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