作者：汪乐洋; 黄海燕; 吴强dna片段编辑单克隆多拷贝基因重复调控序列
摘要：在基因组中,编码区存在许多高度相似的基因簇或基因群（多拷贝基因）,非编码区也存在大量的重复序列。这些重复序列能通过改变染色体的三维结构调控基因的转录,对于生物体的遗传与进化起到了重要的作用。其高度同源的特征使得利用CRISPR/Cas9技术进行基因组编辑时面临更加复杂的状况。如果编辑的片段是二倍体或多倍体,还会产生各条染色单体上的编辑情况不相同的现象。为此本文选择了2个位于同一染色体相距11 kb的高度同源300 bp片段（L1和L2）进行CRISPR介导的DN段编辑。采用一对sgRNA（分别共同靶向两片段的上、下游位点）引导Cas9对HepG2细胞两个高度相似的DN段进行切割。片段编辑的细胞进一步单克隆化后,对获得的22个L1/L2编辑的CRISPR单克隆细胞株进行详细的基因型鉴定。结果发现除了这两个DN段本身被删除外,它们之间的大片段也存在被删除的现象,三个片段的各种反转组合也很频繁。该研究结果对于采用CRISPR/Cas9系统编辑多拷贝基因或重复序列,尤其是对二倍体或多倍体生物进行基因组编辑时具有重要的借鉴和参考价值。
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