作者：李虹 白小涓 刘强 王宁夫p22phox内皮细胞衰老sirna
摘要：设计特异性siRNA（Short interference RNA）诱导人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞NAD（P）H氧化酶活性亚单位p22phox基因沉默,探讨p22phox基因沉默在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的ECV-304衰老中的作用及机理。应用体外转录合成3种siRNA转染体外培养的ECV-304,RT-PCR鉴定对p22phox基因沉默的效率和特异性,确立适宜的转染浓度和基因沉默的持续时间;ECV-304分为空白对照组、AngⅡ组、siRNA转染组、AngⅡ＋siRNA转染组,观察细胞衰老改变及活性氧水平,分析各组细胞p22phox的mRNA及蛋白表达。结果表明：3种siRNA中,一种对p22phox mRNA表达抑制率达到83%,在一定转染浓度范围内,siRNA诱导的基因沉默效率呈剂量依赖性,抑制效率高峰期在24-36h;给予AngⅡ后,β-gal染色阳性细胞数显著增加,出现衰老的特征性改变,衰老细胞p22phox的mRNA及蛋白表达增加,伴有一氧化氮（NO）生成减少,活性氧生成增加,siRNA诱导p22phox基因沉默后降低了活性氧水平,增加NO生成,改善了AngⅡ诱导的ECV-304细胞的衰老改变。siRNA干扰技术可成功诱导NAD（P）H氧化酶p22phox基因沉默,从而减缓AngⅡ诱导体外培养的ECV-304衰老进程,p22phox是防治衰老有希望的分子靶点。
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