作者：汪维鹏; 倪坤仪; 周国华dna适配器snp多重pcrcyp2d6
摘要：建立了一种基于DNA适配器连接介导的等位基因特异性扩增法测定多重SNP。以CyP2D6基因中的5个SNP位点（100C〉T，1661G〉C，1758G〉T，2470T〉C和2850C〉T）为例，用PCR法预扩增得一段含所有待测SNP位点的长片段，然后用限制性内切酶将其消化成短片段，在连接酶的作用下与设计的DNA适配器（adapter）相连；该适配器的一端与限制性内切酶降解后留下的粘性末端相同，另一端带有一段公共序列。在两管中加入与适配器连接的片段作为PCR扩增模板，并分别加人SNP特异性引物和一种适配器特异性的通用引物进行PCR扩增，最后用凝胶电泳法分离PCR扩增产物。由于每管与SNP的两种特异性引物中的一种对应，可以根据每管中扩增片段的大小判断SNP的类型。通过凝胶电泳法可以一次分离与5种SNP类型相对应的引物特异性延伸反应产物；采用该法成功测定了20名健康中国人的CYP2D6基因中5个SNP位点的基因多态性，与限制性片段长度多态性法（RFLP）测定结果完全一致。该方法采用n＋1种引物（n种SNP特异性引物和一种通用引物）进行n重PCR反应，极大提高了PCR反应的特异性，结果准确，可用于同时测定多个SNP位点。
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