作者：刘阳 刘衡川 方梅 陆巧荣 黄偌颖 罗影殊金黄色葡萄球菌叠氮溴化乙锭聚合酶链反应活菌检测nuc基因
摘要：目的将叠氮溴化乙锭（Ethidium monoazide bromide,EMA）与聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）相结合,建立一种快速、有效检测金黄色葡萄球菌活菌的方法。方法用EMA处理金葡菌培养物后提取模板,以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶编码基因（nuc基因）为靶基因进行PCR反应,并对EMA浓度和曝光时间等条件进行优化。结果当检测2×106CFU/ml的金黄色葡萄球菌时,能有效抑制死菌DNA扩增的EMA最小浓度为0.3μg/ml,对活菌DNA扩增没有明显抑制的EMA最大浓度为2μg/ml;经EMA处理后,从含有1%金黄色葡萄球菌活菌混合悬液制备的DNA中可扩增出目的片段。结论 EMA-PCR能有效检测金黄色葡萄球菌活菌,在临床医学和公共卫生领域检测中具有重要的实用价值。
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