作者：伍生军; 倪婷婷; 张守发; 许应天; 孙兴忠...猪附红细胞体sybr荧光定量pcreno基因
摘要：为建一种快速、高效、灵敏的猪附红细胞体（M.suis）检测方法。本研究根据GenBank中的猪附红细胞体α-烯醇化酶（Eno）基因（序列号：AB265823.1）,设计并合成了1对引物P5和P6,通过常规PCR方法对Eno基因中的一段序列进行扩增,并将其纯化后的PCR产物克隆入pMD-18T载体中,从而构建重组质粒。以阳性重组质粒为模板,建立了猪附红细胞体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对其灵敏性、特异性进行检测。在1.44×10~6~1.44×10~2拷贝/μL范围内具有较好的线性关系,相关系数R~2=0.965,检测到的浓度下限为1.44拷贝/μL。特异性试验中仅对猪附红细胞体的检测结果呈阳性,而对猪肺炎支原体、弓形虫、猪链球菌、猪呼吸与繁殖综合征病毒的检测结果均呈阴性。重复性试验结果表明,其组内和组间变异系数均小于2.0%。用该检测方法对49份猪附红细胞体疑似血液样品进行检测,所建立的荧光定量PCR方法检测的阳性率为40.8%（20/49）,高出常规PCR方法检测的阳性率1.33倍。SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的成功建立,为猪附红细胞体感染的早期诊断及定量分析提供了可靠依据。
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