作者：夏洁云; 袁姝姝; 付瑞雪; 王军杰; 徐开林...胸腺上皮细胞单细胞分离胶原酶中性蛋白酶密度梯度离心法
摘要：目的比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞（TEC）分离方法的效果，筛选简单、高效、实用的分离方法。方法将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组：胶原酶Ⅰ组 （Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml）、DispaseⅡ组 （DisⅡ组, 3 mg/ml）、Col IE＋低浓度DisⅡ组 （Col IE/Dis Ⅱ-L组, 0.75 mg/ml）、Col IE＋中浓度DisⅡ组 （Col IE/Dis Ⅱ-M组, 1.5 mg/ml）、Col IE＋高浓度DisⅡ组（Col IE/DisⅡ-H组, 3 mg/ml）。优选出最适消化方法后，将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组。采用血细胞计数板进行总细胞数计数，台盼蓝染色法观察细胞的活性；使用流式细胞术检测胸腺基质细胞（TSC）以及TEC的比例。结果与单独使用DisⅡ与Col IE相比，Col IE与不同浓度Dis Ⅱ联合使用均能加快胸腺组织消化（P〈0.01），获取单个胸腺的总细胞数较多，尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳（P〈0.05或P〈0.01）。与单独使用酶消化组相比，Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例（P〈0.01）。与Percoll对照组相比，Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例（P〈0.05）。此外，各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞。结论Col IE与DisⅡ联合消化，结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC。
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