作者：王韵茹; 李勇; 厉传艺; 惠洪亮; 董红燕; ...心脏成纤维细胞谱系重编程心脏祖细胞
摘要：目的采用非特异性转录因子介导的谱系重编程系统，将小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）直接转分化为心脏祖细胞（cardiac progenitor cells，CPCs）。方法取昆明小鼠乳鼠心肌组织，差速贴壁法分离CFs。免疫荧光染色、流式细胞术分别检测CFs性状及纯度，以携带含小鼠tet-on系统的4种重编程因子Oct4、Sox2、Klf4、c-myc（OSKC）慢病毒等比例感染第3代（P3）CFs。A组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中不加入白血病抑制因子（LIF），加入JAKinhabit1（J11），以抑制向iPSCs方向的转分化。B组：对照组感染空载体病毒。C组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中加入LIF，不加入JI1，不抑制向iPSCs方向的转分化。在特定时间点为感染的细胞更换不同培养条件，观察细胞形态及生物特性的变化：①实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）法检测重编程各个时间点CPCs特异性转录因子Mespl、Nkx2．5、Isll、GATA4及胚胎干细胞多能性因子Oct4、Sox2、c-myc、Klf4、Naong的表达；②CPCs特异性标记Nkx2．5、Is11免疫荧光染色鉴定；（3）CPCs自分化为搏动心肌细胞的检测；④心肌细胞特异性标记cTnI免疫荧光染色鉴定CPCs向心肌细胞方向的分化潜能。结果①形态学观察，病毒感染11—14天，可见部分CFs形态发生改变，形成CPCs样克隆；（2）CPCs克隆Nkx2．5、Isll免疫荧光染色阳性；③CPCs可自分化为搏动的细胞团，其中的细胞cTnI免疫荧光染色阳性；（4）Real—timeRCR检测结果显示，重编程第4天，CPCs早期特异性转录因子Mespl即开始表达，而iPSCs多能性因子Naong在重编程第9天才开始表达。结论心脏成纤维细胞可以直接转分化为CPCs。
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