作者：张微; 岳丽玲; 张延勇; 韩翠翠; 徐天娇; ...pcdh10基因慢病毒载体载体构建
摘要：目的构建原钙黏蛋白10(PCDH10)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系。方法 2018年6—11月,根据PCDH10基因序列设计引物,应用PCR法扩增PCDH10全长片段,连接线性化的pLV-EF1α-GFP-Puro载体,获得pLV-PCDH10慢病毒重组质粒,测序正确后进行PCDH10基因慢病毒载体的包装及滴度测定。将重组质粒pLV-PCDH10转染MDA-MB-231细胞,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测MDA-MB-231细胞中PCDH10的表达情况。结果测序结果证实成功构建慢病毒表达载体pLV-PCDH10,病毒滴度为5×10^8TU/mL;转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR和Western blot结果显示PCDH10的m RNA和蛋白表达较对照组高表达。结论成功构建pLV-PCDH10慢病毒载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系,为深入研究PCDH10基因在乳腺癌发生发展中的功能提供实验基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
