作者：邱玲; 冯建国; 杨继梅; 李茂; 王晓斌血清标准品绝对含量
摘要：目的构建 miRNA-221-3p的标准品,并检测其血清绝对含量,为今后进一步明确检测血清miRNA-221-3p在 辅助判断疾病中的潜在价值和意义.方法：设计 miRNA-221-3p特异性引物,提取样品血清总RN A ,反转录获得含miRNA- 221-3p特异性引物cDNA.通过PC R获得含有miRNA-221-3p的 DN段,然后置入到pcDNA3.1质粒中.经测序确定重 组质粒 pcDNA3.1（pcDNA3.1-miRNA-221-3p）构建正确.通过 PCR 从 pcDNA3.1-miRNA-221-3p 中获得含有 T7 启动子和 miRNA-221-3p的基因片段,然后用体外转录得到miRNA-221-3p的标准品,最后计算出标准品的浓度（copies/^gRNA）.取 miRNA-221-3p标准品反转录进行梯度稀释实时荧光定量PCR,根据标准品的浓度和C T 值绘制标准曲线.结果： miRNA- 221-3p重组质粒构建成功,体外转录得到纯化的miRNA-221-3p标准品.标准曲线公式为：Y=-0.255X ＋ 12.543,相关系数 R2=0.9999,X 代表Ct值 ,Y 代表样品的含量（copies）的 lg值.结论：成功获得血清miRNA-221-3p标准品, miRNA-221-3p标 准品绝对含量（ copies/^gRNA）等于 3.49214E＋12e-0.5871〇r 值.
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