作者：刘勋; 陈明; 杨志惠gtpbp4基因rna干扰慢病毒载体结肠癌
摘要：目的：为了建立GTPBP4基因沉默的人结肠癌细胞株，研究GTPBP4基因对人结肠癌细胞株RKO细胞增殖和凋亡的影响，构建并鉴定GTPBP4基因RNA干扰慢病毒载体。方法：针对GTPBP4mRNA设计siRNA，构建pGCSIL-GFP—GTPBP4慢病毒载体，感染293T细胞，包装产生慢病毒，并进行滴度测定。将慢病毒转染人结肠癌细胞株RKO，通过Real-timePCR和WestemBlot分析GTPBP4基因敲减效率。结果：结果显示，插入DNA序列与目的基因序列一致，提示插入人GTPBP4基因序列正确。293T细胞中病毒滴度的测定结果2×108TU／mL。经siRNA慢病毒感染后，实验组RKOGTPBP4基因mRNA水平表达量受到显著抑制，Western Blot结果显示敲减效率达到72．9％。结论：GTPBP4基因RNAi慢病毒载体构建成功，可用于结肠癌生物行为等各方面的研究。
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