作者：付广丽; 鲍艳; 吴桂堂; 刘兴容腺病毒表皮生长因子人牙髓干细胞转染增殖
摘要：目的：重组腺病毒介导的表皮生长因子（recombinant adenovirus mediated epidermal growth factor,r Ad-EGF）质粒的构建,及体外转染人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,h DPSCs）后对其增殖的影响。方法：采用目的载体PYr-adshuttle-1和EGF基因（PCR4-TOPO-EGF）构建PYr-ads-1-EGF,在体外重组到PAd/PL-DEST构建r Ad-EGF,并将其体外转染到h DPSCs。将h DPSCs分为3组：r Ad-EGF转染组（实验组）、r Ad-EGFP阴性对照组和空白对照组。当细胞密度达到70%时,用MOI=100的r Ad-EGF或r Ad-EGFP转染各组细胞,在37℃,5%CO2的条件下,用胰酶消化培养48 h后的各组细胞并收集,采用Western blotting检测转染后各组细胞EGF蛋白的表达,采用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果：经PCR鉴定,r AdEGF包装成功。在一定时间内,r Ad-EGF转染入h DPSCs,实验组h DPSCs的EGF蛋白表达水平显著高于其他两组（F=339.795,P〈0.001）,其细胞增殖能力明显升高（F=23.937,P〈0.001）。结论 ：r Ad-EGF质粒构建成功,r Ad-EGF转染h DPSCs后,其EGF蛋白明显升高,对其增殖具有促进作用。
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