作者：李佳凌; 李尹凤; 汤军; 蔡延森梅毒螺旋体原核表达载体质粒pet22b重组蛋白的表达
摘要：目的：采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体，并进行酶切鉴定，为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法：将化学合成的寡核苷酸（oligo）通过PCIk的方法拼接成TP17目的基因的序列，并将合成好的序列克隆入pMD18-TSimple载体。以pMD18-TSimple-TP17为模板，PCtk扩增TP17基因片段。PCR产物通过1．5％琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带，随后用EeoRI和XhoI对TP17回收所得片段及目的载体pET22b进行双酶切并连接。连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后，挑取克隆，提取质粒并鉴定。最后将质粒转化至BL21菌株中。挑取克隆，提质粒，进行鉴定。结果：PCR扩增片段、双酶切均出现445bp大小的目的基因条带，与预期结果相符。结论：本研究成功构建了重组质粒pET22b—TP17，为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础。
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