作者：曹新梅; 张岱权; 王栩; 郑春燕shrnalewis细胞
摘要：目的：探讨shRNA表达质粒抑制小鼠肺腺癌Lewis细胞C-erbB-2基因的表达。方法：构建pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒和4种GPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒。按DNA∶LIPOFECTAMINE 2000为1∶2、1∶2.5、1∶3,将pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒转染小鼠肺腺癌Lewis细胞,应用荧光显微镜观察转染效率。实验分组：pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-347组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-1944组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-2310组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、空白组,应用RT-PCR技术检测转染前后C-erbB-2 mRNA的水平,应用Western blotting技术检测其蛋白的表达。结果：DNA∶Lipofectamine 2000为1∶2.5时,转染效率最高,后续试验均按此比例进行转染。4种pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒均能降低C-erbB-2 mRNA和蛋白的表达,其中干扰效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669。结论：pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒能有效抑制小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因的表达。
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