作者：王丽; 李洪; 张志霞; 刘晓燕; 谢华福; 宋...流行性乙型脑炎病毒e蛋白基因反转录一聚合酶链反应基因克隆表达载体
摘要：目的；获得JEVE蛋白基因，构建重组表达载体并在E．eoli中高效表达。方法：参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14—14株序列设计一对特异性引物，采用RT—PCR法扩增E基因全长，克隆至PUCm—T载体，经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中，转化入BL21（DE3），IPTG诱导表达，对表达产物进行SDS—PAGE电泳分析。结果：限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明，扩增出了JEVE蛋白基因全长1500bp，成功构建了重组质粒pET-32a／JEVE，SDS—PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达，表达量占总菌体蛋白的35％。结论：在大肠杆菌中成功表达了JEVE蛋白，为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
