作者：王丽; 何涛; 郑小莉; 宋杰; 谢华福; 梅志...密码子偏好性基因合成重叠pcr原核表达
摘要：目的：构建猪干扰素-γ基因（PoIFN-γ）的融合表达质粒,并在原核系统表达,为猪γ干扰素生物药剂或疫苗佐剂的开发奠定基础。方法：选择大肠杆菌偏爱密码子,分成20个长约48bp且相互配对的寡核苷酸片段,采用重叠PCR方法人工合成了猪干扰素-γ成熟蛋白编码基因,并经测序证实后克隆至原核表达载体pQE30中。经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,不同温度下以IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果：限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了PoIFN-γ基因,成功构建了重组质粒pQE30/PoIFN-γ,SDS-PAGE分析显示目的蛋白以包涵体的形式在大肠杆菌中获得高表达,表达量占总菌体蛋白的84.5%。结论：应用重叠PCR合成PoIFN-γ基因并在大肠杆菌中得到了高效表达。
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