作者：龙梦瑶; 蒋蔚; 陈永军; 熊挺; 陈芸; 韩阳...肉制品肠出血性大肠杆菌o157
摘要：建立免疫磁珠分离法（immunomagnetic separation,IMS）与实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR）技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157的方法。利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特异性多糖（O-specific polysaccharides,O-SP）作为筛选抗原,制备抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体。将PM 3-50纳米磁珠经3-乙基碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化后,与抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体结合,得到偶联量为150μg/mg的免疫磁珠。免疫磁珠的最高捕获量为13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特异性捕获的最低检测限为2.2 CFU/m L。根据EHEC 0157血清型的特异性基因rfb E（Gen Bank登录号：S83460）设计引物和荧光探针,将IMS与RT-PCR相结合进行检测EHEC O157。当肉制品中EHEC O157含量≥1 CFU/g（2.5 g样本）,免疫磁珠能捕获,并通过EC肉汤培养基增殖3h后,RT-PCR即可成功检测,全程只需6-7 h。IMS-RT-PCR相结合的检测方法,在大大缩短了检测时间的基础上,再次降低了EHEC O157的检测限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157传染方面具有重要意义。
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