作者：梅匀安; 袁庄川; 韩秀杰; 赵凡凡; 王晓杜日本脑炎病毒原核表达免疫原性
摘要：日本脑炎是一种由日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的、经虫媒传播并可导致母猪流产的急性病毒性传染病.JEV的M蛋白参与病毒的感染过程且能诱生具有轻度中和作用的抗体.本研究提取JEV上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增该病毒的prM基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28 （a）上,构建重组原核表达质粒pET-28 （a）-JEV-prM,转化大肠杆菌BL21 （DE3）菌株,IPTG诱导表达重组his-JEV-prM蛋白,SDS-PAGE结果表明,获得分子量大小为24 ku的重组蛋白,主要以包涵体形式表达,薄层扫描分析表明,表达量占总菌体蛋白的30％以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,占总蛋白比例达60％以上.纯化蛋白his-JEV-prM免疫BALB/c小鼠,制备了小鼠抗JEV-prM抗体,Westemblotting和间接免疫荧光检测小鼠抗JEV-M抗体的特异性.纯化蛋白能诱导小鼠产生高滴度抗体,并且该抗体能特异识别原核、真核和病毒表达的prM.本研究表达纯化的prM蛋白和小鼠抗prM抗体,为基于M蛋白的疫苗开发、检测JEV的方法及致病机理研究提供了工具.
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