作者:高艺林; 王权; 卫君超; 邓志瑞; 张文举; ...35完全抗原单克隆抗体
摘要:采用碳二亚胺(EDC)法合成游离3,3',5,5'-四碘甲状腺原氨酸(FT4)的完全抗原FT4-BSA和FT4-OVA,将FT4-BSA作为免疫原,免疫BALB/c雌鼠,以FT4-OVA为包被原,利用ELISA方法确定抗FT4多克隆抗体的效价和敏感性。通过杂交瘤技术筛选出分泌抗T4单克隆抗体(T4 McAb)的杂交瘤细胞株,制备腹水单抗。经检测,腹水单抗效价是1∶9.0×104,以此建立的间接竞争ELISA方法,半数抑制质量浓度(IC50)是24.7 ng/mL;FT4单抗与游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的交叉反应率是4.2%,与促甲状腺激素(TSH)无交叉反应;经抗体类型鉴定,获得的单抗重链属于IgG1亚类,轻链属于κ型。结果表明:本试验制备的单抗特异性强、敏感性高,能够为T4免疫学检测方法的建立和相关研究奠定良好基础。
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