作者：谢志勤; 谢芝勋; 刘加波; 庞耀珊; 邓显文...单克隆抗体制备夹心elisa检测
摘要：将禽呼肠孤病毒（ARV）S1733株进行鸡胚增殖，增殖的病毒经浓缩、纯化后灭活，按每鼠100¨g的病毒用量免疫BALB／c小鼠5次，每次间隔7d，第五次免疫3d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合及筛选，阳性孔经3次有限稀释法克隆，用克隆的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。抗体经Westernblotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光等方法进行检测验证。经验证的的单克隆抗体作为包被抗体，建立双抗体夹心ELISA方法检测ARV。对建立的方法进行特异性和敏感性试验。结果：筛选成功获得1株能稳定分泌抗ARV的单克隆抗体杂交瘤细胞株SF6．3K3；免疫荧光和Dot-ELISA方法证明该单克隆抗体能特异性地检测ARV；间接ELISA方法测定腹水单克隆抗体效价达10’以上，经亚型测定为IgGl，并且具有良好的特异性；用单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法特异性强，与对照的毒株新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）、传染性支气管炎病毒（IBV）、传染性喉气管炎病毒（ILTV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）无交叉反应，检测的敏感性为5×10-5μg／乩的病毒量。结果表明，本试验建立的夹心ELISA检测ARV方法具有较高的特异性和敏感性，可以用于ARV的检测。
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