作者：王晓丰; 李玉峰; 王先炜; 王海燕; 姜平; ...欧洲型美洲型prrsv核衣壳蛋白单克隆抗体制备与鉴定nucleocapsidproteinmonoclonalantibody杂交瘤细胞株间接免疫荧光试验呼吸综合猪繁殖重组表达质粒原核表达载体免疫印迹试验杂交瘤技术特异性单抗
摘要：利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPIG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku.用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体.经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体.亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶640,腹水的效价为1∶256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础.
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