作者：娄忠子; 杨彬; 兰喜; 李学瑞; 李志勇; 殷...猪圆环病毒病cap干扰素基因表达载体的构建重组真核表达载体间接免疫荧光双表达载体基因亚克隆核衣壳蛋白质粒转染阳性细胞抗性筛选克隆载体高效表达pcr方法western细胞系
摘要：通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-y中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV.重组质粒转染BHK-21细胞后进行ZeocinTM抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-y在BHK-21细胞中的表达.结果显示,试验中筛选出1株ZeocinTM抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法.
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