作者：陈巧红; 盛楠; 孙静; 冯波; 胡格大鼠肺微血管内皮细胞组织块贴壁法免疫磁珠纯化法免疫荧光鉴定
摘要：为获得纯度较高的大鼠肺微血管内皮细胞,试验采用以下试验方法.（1）改进组织贴块法制备原代细胞：原代细胞制备分装组织块时,可用血清将过多的组织块吹下继续贴壁,可提高原代细胞的制作效率;与传统方法60h弃组织块相比,50h弃组织块细胞状态更好,主要杂细胞成纤维细胞较少.（2）改进免疫磁珠纯化法纯化细胞：在免疫磁珠纯化的过程中,抗体使用说明书和大量文献表明,抗体在4T：效价较髙,因此在孵育抗体时由标准操作方法中的室温孵育改为4t孵育;摇床摇晃EP管时发现有大量泡沫产生,影响了细胞、抗体、磁珠的充分接触,因此改为3～5min手动摇晃一次;在纯化后的培养基中加入内皮细胞生长支持物（ECGS）易导致细胞形态的变化,影响细胞活性,因此采取在纯化后就加入完全培养基代替纯化后2h加入含有ECGS的完全培养基等手段.结果表明,改进后试验方法较标准法所得细胞数量多,状态佳,因此提髙了细胞纯化的效率和纯化后的细胞质量.
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