作者：张译元; 郭延华; 王聪慧; 唐红; 南海艳; ...绵羊重编程转录组测序
摘要：【目的】建立绵羊(Ovisaries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色以及实时荧光定量PCR检测克隆细胞的生物学特性;利用高通量测序技术对诱导0、10、20、30d的阳性细胞的差异表达基因进行筛选。【结果】克隆细胞中SOX2、OCT4、SSEA-1蛋白免疫荧光染色均呈阳性;OCT4、SOX2、Nanog基因表达量均极显著高于成纤维细胞;0和30d转录组测序表明,被注释到GO数据库的差异表达基因有9465个,其中,上调基因6987个,下调基因2478个;KEGG分析共有5773个基因注释到259个通路中,其中,P53信号通路显著富集,且其在干细胞增殖方面起着非常重要的作用。【结论】初步成功建立了绵羊诱导性多能干细胞。
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