作者：张钫; 郑伟; 韩文瑜改造克隆氨基酸序列抗菌肽基因开放阅读框pcr扩增肿瘤细胞抗菌活性表达质粒抑菌活性中国鲎血细胞密码子asn酰胺化稳定性包涵体连接测序引物载体
摘要：中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptlde)-鲎素，具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列，设计了一对引物，并对原抗菌肽基因进行改造，在基因开放阅读框末端添加了Asn密码子，使抗菌肽羧基末端酰胺化，旨在提高其稳定性和抗菌活性。PCR扩增获得改造过的目的片段，连接于载体pMD18-T，测序后，与pET-28c(+)连接，构建表达质粒pET28c—rr，测序鉴定正确后，转化大肠杆菌E．coli．BL21(DE3)。表达菌株经终浓度为1mmol/L的IPTC诱导后以包涵体的形式表达，在体外表现出明显的抑菌活性。
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