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GSK3抑制剂CHIR99021调控人诱导多能干细胞向运动神经元分化

作者:易寰; 谢冰冰; 刘本; 刘佳; 李敏; 徐莉; ...诱导多能干细胞运动神经元

摘要:目的 探讨不同浓度糖原合酶激酶-3(GSK3) 抑制剂CHIR99021对人诱导多能干细胞 (iPSC) 诱导分化为运动神经元的影响,分析其促进分化的最适浓度。 方法 在分化早期加入不同浓度CHIR99021培养iPSC 6 d,并依此将其分为对照组 (0 μmol/L) 及1、2、3、4 μmol/L组。分别在诱导分化早期、中期、晚期对各组细胞进行光镜观察和免疫荧光鉴定。 结果 在分化早、中、晚各期,细胞计数显示CHIR99021浓度越高细胞数量越多。早期,0~3 μmol/L组神经干细胞标志物SOX1表达量无差异,4 μmol/L组低于其余各组 (P均<0.05);中期,0~3 μmol/L组运动神经元前体标志物Olig2的表达量随CHIR99021浓度增加而增加 (P<0.05),而4 μmol/L组则稍低于3 μmol/L组 (P<0.05);晚期,2~4 μmol/L组的细胞成功表达成熟运动神经元标志物胆碱乙酰转移酶 (ChAT),而0~1 μmol/L组未表达。 结论 在神经分化的早期应用一定浓度的CHIR99021可以促进iPSC的细胞增殖,提高分化效率,并最终诱导其成为成熟运动神经元,其中3 μmol/L为诱导最佳浓度。

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