作者：田翠; 来松; 徐多娇; 侯翠柳; 刘洋; 王红...缺血再灌注损伤blue双染色法蛋白酶体亚基小鼠
摘要：目的：探讨改进的主动脉逆行灌注TTC-Evans blue双染法对小鼠心肌梗死面积的显示效果,并探讨蛋白酶体参与缺血/再灌注（I/R）的作用。方法：16只8周龄,C57BL/6J野生小鼠,随机分为假手术组（sham组）及I/R组,采用结扎冠状动脉左前降支45min,复灌2h,复制小鼠心脏I/R损伤模型。用改进主动脉逆行灌注法,分别灌注TTC和Evans blue染料,垂直于心脏长轴切片,计算梗死面积;Western-blot方法检测心肌组织中蛋白酶体各亚基表达;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡,试剂盒检测蛋白酶体活性及Caspase-3活性。结果：与sham组相比,I/R组的心肌梗死面积/危险区面积比值增加32.6%（n=8,P〈0.01）,心肌组织中Caspase-3活性升高2.82倍（n=8,P〈0.01）,而蛋白酶体糜蛋白酶样活性降低32%（n=8,P〈0.01）,免疫蛋白酶体亚基β1i、β2i、β5i蛋白表达分别降低49%、48%和54%（n=8,均P〈0.05）。结论：改进的TTC-Evans blue双染色方法操作性强,成功率高,能够更好地为心肌I/R损伤研究提供可靠的形态学支持,心肌I/R损伤导致小鼠心肌组织蛋白酶体功能被抑制及心肌梗死面积、凋亡和Caspase-3活性增加。
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