作者：杨敏; 苗艳菊; 王绿娅; 杜杰心脏成纤维细胞表型巨噬细胞三维培养
摘要：目的：探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensionⅡ,AngⅡ）作用下,细胞三维共培养体系中巨噬细胞对心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）表型转化的影响。为观察细胞之间的相互作用,探讨高血压导致心脏纤维化的分子机制及防治策略提供了新思路。方法：分离、培养原代小鼠骨髓巨噬细胞及乳鼠CFs,建立巨噬细胞和CFs多肽纳米凝胶三维共培养体系。实验分为CFs组,巨噬细胞与CFs共培养组,CFs＋AngⅡ处理组,巨噬细胞与CFs共培养＋AngⅡ处理组。通过免疫荧光染色鉴定培养的巨噬细胞（巨噬细胞标志物F4/80）及成纤维细胞（波形蛋白Vimentin）;采用倒置相差显微镜观察三维培养细胞形态;免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;实时定量PCR检测α-SMA、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）及促纤维化因子[转化生长因子β（TGF-β）、结缔组织生长因子（CTGF）]的表达。结果：在无AngⅡ作用下,巨噬细胞与CFs共培养组与单独培养的CFs组比较,α-SMA mRNA和蛋白表达,并且CollagenⅠ、TGF-β和CTGF mRNA的水平差异无统计学意义。巨噬细胞与CFs共培养组经AngⅡ处理后,可明显诱导α-SMA mRNA和蛋白高表达,并且上调CollagenⅠ、TGF-β和CTGF mRNA的水平。结论：在AngⅡ作用下,三维培养体系中巨噬细胞可促进CFs向肌成纤维细胞表型转化,提示巨噬细胞在AngⅡ导致心脏纤维化的病理过程中发挥关键作用。
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