作者：刘雷; 黄星华; 李坚伟; 周建华; 陈统权腺病毒traildd3pca3
摘要：目的：构建DD3（PCA3）启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL过表达腺病毒载体,并对其进行病毒包装及滴度测定。方法：将DD3启动子用分子克隆技术替换掉穿梭质粒p HBAd-U6-GFP原有启动子U6,再用Age I单酶切将制备的重组质粒p HBAd-DD3-GFP线性化,将TRAIL基因片段克隆至线性化p HBAd-DD3-GFP上,经抗性筛选后PCR及测序鉴定为p HBAd-DD3-TRAIL载体。将其连同病毒骨架质粒p HBAd-BHG共同转染至HEK293细胞包装成病毒并扩增,测定病毒感染性滴度。结果：经PCR及测序验证证实成功构建DD3启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL过表达腺病毒载体p HBAd-DD3-TRAIL并包装扩增,病毒滴度为1.58×1010PFU/ml。结论：构建DD3启动子调控的凋亡配体TRAIL过表达重组腺病毒,可用于下一步在前列腺癌细胞中特异性地表达及诱导细胞凋亡杀伤靶细胞效应研究中。
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