作者：滕隔玲 杨业鹏 李载权 周梅 李五岭nfsb基因硝基还原酶cb1954自杀基因凋亡
摘要：目的：体外观察大肠杆菌硝基还原酶／[5-（1-氮丙啶）-2，4-二硝基苯甲酰胺]（以下简称NTR／CB1954）自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞的杀伤效应，探索一种新的宫颈癌基因治疗方法。方法：利用PCR技术从Escherichia coli K12的基因组中扩增出编码NTR的基因nfsB，酶切后，连接到真核表达载体pcDNA3上，获得重组载体pcDNA3-nfsB，lipofectamine^TM2000脂质体转染法将pcDNA3-nfsB转染Hela细胞，筛选稳定表达细胞株，应用RT—PCR以及SDS—PAGE检测NTR在Hela细胞中的表达，Mrrr法检测NTR／CB1954对Hela细胞活力的影响，流式细胞术检测亚二倍体细胞率改变，PI／Hoechest33258双染荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡率。结果：成功构建了真核表达载体pcDNA3-nfsB，获得稳定表达NTR的Hela细胞株，在mRNA水平以及蛋白水平检测到NTR在Hela细胞中的表达，NTR／CB1954自杀基因系统明显影响Hela细胞的活力，增加了Hela细胞的凋亡率。结论：NTR／CB1954自杀基因系统对Hela细胞在体外通过凋亡产生明显的杀伤效应。
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