作者：魏江; 于洋; 罗光华; 张俊; 徐宁; 张晓膺雌激素类载脂蛋白m凝胶迁移实验染色质免疫共沉淀
摘要：目的 探讨雌激素调节载脂蛋白M的机制。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测不同浓度牛血清清蛋白结合雌激素（E2-BSA）处理HepG2细胞24 h后载脂蛋白M（ApoM）的表达;RT-PCR检测不同雌激素和雌激素受体α（ER-α）拮抗剂MPP共同处理HepG2细胞24 h后ApoMmRNA的表达;PCR扩增ER-α全基因和ApoM转录起始位点上游2 000 bp与下游＋2 000 bp之间不同长度片段,连入荧光素酶报告基因质粒pGL3-basic,各重组质粒转染后对表达荧光素活性进行检测;凝胶迁移实验和染色质免疫共沉淀进一步验证ER-α和ApoM启动子区的相互作用。结果 E2-BSA呈剂量依赖性上调HepG2细胞ApoM的表达,这一效应可以被MPP所抑制;通过荧光素酶报告基因实验鉴定出ApoM基因启动子区存在明显促进基因转录的调控区域[-1 580～-1 575 bp（-GGTCA-）]。对该区域序列定点突变后重组荧光素酶报告基因表达的荧光素酶活性下降,而共转染未突变的荧光素酶报告基因质粒则荧光素酶活性上升;凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀结果显示,雌激素受体α与该区域特定序列存在相互作用。结论 雌激素通过ER-α上调载脂蛋白M的表达。
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