作者：张勤; 张遵真hogg1锤头状核酶真核表达载体特异性pcdna3酶基因酶表达重组子酶切位点dna测序
摘要：目的:设计并合成人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体.初步探讨其在A549细胞中的瞬时表达效应.方法:运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,阳性重组子由BamHⅠ和EcoRⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实.大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A549,RT-PCR(逆转录多聚酶链反应)法半定量检测转染细胞中HOGG1 mRNA表达的改变.结果:经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3.1(+)的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,命名为pcDNA3.1(+)-PZ.经RT-PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1 mRNA表达下降36%,与空白细胞组差异有显著性.结论:成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体.核酶在A549细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用.
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