作者：贾梅兰; 王茂春; 徐园; 周宇荀; 李凯; 肖...启动子甲基化二代测序克隆测序
摘要：目的：利用二代测序技术检测GT1—7细胞中KISS1和GnRH基因启动子范围内的甲基化状态，并用金标准的亚硫酸氢盐修饰后的克隆测序作为对照，比较二代测序与金标准克隆测序在研究DNA甲基化检测中的差别。方法：提取GT1—7细胞基因组DNA并进行亚硫酸氢盐处理。进行巢式PCR，将PCR产物进行二代测序。同时采用金标准的亚硫酸氢盐修饰后克隆测序的方法作为对照，对相同批次的PCR产物进行克隆测序。结果：PCR产物二代测序结果表明K1SS1和GnRH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整，结果准确。挑取10个克隆进行一代测序结果表明序列无丢失，KISSI和GnH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整。结论：利用高通量的二代测序技术能够有效的对DNA甲基化的PCR产物进行检测，二代测序和克隆测序都是研究DNA甲基化的有效方法，但前者与克隆测序相比每一个读取序列（reads）都相当于一个单克隆，且二代测序每个区段得到成百上千个reads，因此二代测序结果更加精确。
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