作者：张丽; 郭万柱; 李晓琪; 黄亚平; 李雯内江猪白细胞介素18原核表达
摘要：以ConA刺激的内江猪外周血单核淋巴细胞（PBMC）为模板，采用RT-PCR技术扩增出猪IL-18全长基因，克隆其成熟蛋白的编码基因（471bp）至pMD18-T克隆载体，经双酶切和测序获得阳性克隆。通过EcoRⅠ／XhoⅠ双酶切及连接反应，构建了pET-32a（＋）-IL-18原核表达质粒。经双酶切和DNA测序证实重组质粒构建正确，将阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS-PAGE，Western-blot证实表达出35kD左右的融合蛋白。经实验确定重组内江猪IL-18蛋白诱导表达的最佳条件为IPTG 0．2mmol／L，30℃诱导培养5h。在最佳表达条件下，pIL-18的相对含量为59．6％。内江猪IL-18的原核表达为重组IL-18的纯化及其生物学功能的进一步研究提供了基础。
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