作者：姚军 李烨佳 钱翠娟小鼠t淋巴细胞rna干扰notch3基因sirna排斥反应
摘要：研究siRNA下调Notch3对小鼠T淋巴细胞体外增殖的影响，并初步探讨其免疫调节机制。从小鼠脾脏分离制备T淋巴细胞悬液；将化学合成的靶向Notch3基因的siRNA在Lipofectamine2000介导下转染小鼠淋巴细胞；通过Westernblot检测各组细胞中Notch3蛋白水平的变化；以不同浓度的Notch3siRNA作用于该小鼠T淋巴细胞模型，流式细胞术检测CD3＋T细胞早期活化标志CD69分子的表达；MTT检测Notch3-siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用；EMSA检测NF-κB活性。在淋巴细胞体外培养试验中，转染Notch3siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内Notch3的表达，下调Notch3可以显著抑制刀豆蛋白A（ConA）诱导的T细胞CD69的表达；同时下调Notch3对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用；而且发现下调Notch3能明显抑制ConA诱导的NF-κB活化。实验结果提示，下调Notch3信号可通过抑制NF-κB活化对小鼠T淋巴细胞活化与增殖发挥抑制作用。
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