作者：粘红; 安利国; 赵岩; 陈吉中; 范国才; 王...肝癌细胞单链抗体scfv噬菌体抗体库筛选
摘要：构建抗人肝癌细胞单链抗体库,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体.从Hep G2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,RT-PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因,用(Gly4Ser)3 连接肽基因,经重叠延伸反应,在体外将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.以Hep G2细胞为抗原对抗体库进行淘选,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性,并对阳性克隆进行表达.成功构建了库容为1.1×106抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库,经筛选得到了与Hep G2细胞具有较强结合能力的单链抗体,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达.序列测定结果表明,VH和VL基因符合小鼠抗体可变区特征,scFv基因拼接正确.
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