作者：陈昌国; 陈秋圆; 侯兵兵; 刘新萍; 董优优环介导等温扩增技术弧菌溶藻弧菌快速检测gyrb基因
摘要：目的应用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)建立针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法。方法以溶藻弧菌标准株(ATCC-17749)和溶藻弧菌野生株(WT)为研究对象,通过在线生物学软件(primerexplorer.jp/e/)设计针对溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒温水浴进行等温扩增,优化反应条件,建立快速检测方法。结果①经2g/dl凝胶电泳结果显示反应温度为61℃时扩增产物成像效果较60℃,62℃和63℃明显,为适宜反应温度;②在61℃条件下反应60 min和90 min凝胶电泳成像效果差异不大,反应时间为60 min能满足扩增需要;③利用同一体系对临床6种其它常见致病菌进行等温扩增时未出现阳性条带,提示整个体系特异度较好;④采用模板稀释法验证该LAMP体系检测的灵敏度为10-4mg/L。结论建立了基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法,具有良好的特异度和敏感度,对快速检测溶藻弧菌有重要意义。
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