作者：谭玉华; 朱应竹; 江燚; 陶佳俊; 吴能伟结核分枝杆菌t细胞时间分辨免疫荧光法性能评估
摘要：目的 建立一种检测结核感染T细胞释放 γ-干扰素（IFN-γ）的时间分辨免疫荧光法（TRFIA）及初步临床应用.方法 选择73例结核分枝杆菌阳性的肺结核患者,77例结核分枝杆菌阴性的肺结核患者,25例肺外结核患者,52例呼吸道疾病以外的非结核患者,70例非结核呼吸道疾病（含肺癌）患者作为研究对象.利用早期分泌抗原靶蛋白6（ESAT6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）作为结核分枝杆菌特异性抗原,刺激患者全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞释放IFN-γ.植物血凝素L作为有丝分裂原,可非特异地刺激IFN-γ的产生.应用双抗体夹心TRFIA定量测定血浆中的IFN-γ浓度.评价TRFIA检测IFN-γ的精密度、检测低限、生物检测限、功能灵敏度、线性、准确度和特异度等分析性能指标,并与酶联免疫法（ELISA）进行比对试验研究.方法间结果差异比较采用χ2检验,P〈0.05为差异具有统计学意义.结果 TRFIA检测IFN-γ的捕获抗体包被浓度为5.0μg/ml,生物素标记抗体使用工作稀释度为1：1800和铕标记物使用工作稀释度为1：500;实验内变异系数（CV）〈5％,实验间CV〈10％;检测低限0.69 pg/ml,生物检测限0.90 pg/ml,功能灵敏度1.80 pg/ml;线性范围2～5000 pg/ml;检测国际生物标准参考品的偏倚不超过5％;其他常见的细胞因子和常见内源性干扰物（胆红素、血红蛋白和三酰甘油）样本对该方法检测结果无明显影响.TRFIA检测297例临床样本结果判断与临床诊断的一致率可达85.19％;TRFIA与ELISA的结果具有高度一致性（κ=0.9931）,且TRFIA与ELISA的阳性检出率结果差异无统计学意义（χ2=0,P〉0.05）.结论 TRFIA检测IFN-γ的精密度好,灵敏度高,线性范围宽,准确度好,特异度强,临床符合率高,能满足临床检测需要.
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