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GPR30与AMF正向反馈调控促进子宫内膜癌进展的机制研究

作者:李伊然; 叶磊; 王凯; 万小平子宫内膜癌雌激素

摘要:目的:探讨子宫内膜癌(EC)中G蛋白偶联跨膜受体30(GPR30)与自分泌移动因子(AMF)正向反馈的调控机制。方法:免疫组化和免疫荧光法检测EC患者子宫内膜组织中AMF和GPR30的表达情况。Westernblot法检测雌激素及GPR30特异激动剂G1对RL95-2细胞、KLE细胞及SPEC-2细胞AMF分泌的调控。使用shRNA干扰、qRT-PCR、Westernblot及细胞免疫荧光验证雌激素膜受体GPR30介导的AMF表达和分泌。qRT-PCR和Westernblot法检测AMF刺激前后细胞GPR30的表达情况。使用信号通路蛋白芯片筛选AMF表达下调前后G蛋白相关信号通路变化,并通过Westernblot验证。结果:AMF和GPR30在内膜癌组织中呈高表达,且两者表达水平呈正相关。雌激素刺激后,子宫内膜癌细胞分泌的AMF均显著增多,且与雌激素浓度呈正相关。GPR30特异激动剂G1上调了AMF的分泌。干扰GPR30表达致AMF的表达和分泌下降。外源性AMF刺激可上调GPR30mRNA及蛋白水平。AMF表达下调后MAPK-ERK信号通路明显受到抑制,同时阻断MAPK-ERK信号通路可消减AMF对GPR30的上调作用。结论:内膜癌细胞中雌激素通过GPR30能显著上调AMF的表达及分泌;AMF可激活MAPK信号通路正向反馈调控GPR30表达。E2-GPR30-AMF轴为内膜癌雌激素致瘤理论提供重要补充,进而为寻找能阻断雌激素作用靶点关键因子的分子靶向治疗提供可靠的实验依据。

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现代妇产科进展

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