作者：贾德俊 崔海宁slug基因干扰腺相关腺病毒胃癌肿瘤增殖血管生成
摘要：目的 构建携带目的基因的rAAV—EGFP—Slug—siRNA载体。方法构建pDC316-EGFP—Slug—siRNA质粒，扩增和回收EGFP—Slug—siRN段；酶切pSNAV2．0-lacz—d载体质粒，并与上述产物进行连接；转化感受态大肠杆菌DH5st，得到pSNAV2．0-EGFP—Slug—siRNA，酶切和测序对其进行鉴定。制备rAAV2-EGFP—Slug—siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定。将BGC-823转染rAAV—EGFP—Slug—siRNA和pSNAV2．0-EGFP；鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）试验检测血管生成，MTr比色法检测细胞存活率。结果质粒pSNAV2．0-EGFP—Slug—siRNA，经PCR、酶切和测序鉴定，质粒构建正确。将构建成功的载体质粒与HSV1-rc／UL2共转染包装细胞BHK-2，成功复制和包装出rAAV2-EGFP—Slug—siRNA，经检测目的片段插入成功。Slug—siRNA有效抑制BGC-823细胞内Slug表达后，肿瘤血管生成被抑制，细胞存活率明显降低。结论成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV—EGFP—Slug—siRNA病毒载体。干扰Slug可抑制肿瘤血管生成，抑制胃癌细胞BGC-823的生长增殖。
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