作者：李晓雪; 王勇; 孙继奇; 朱晔荣; 马琳; 向...川西獐牙菜原核表达组织表达分析
摘要：该研究根据川西獐牙菜转录组信息获得7-脱氧马钱子酸羟化酶(SmDL7H)基因的全长cDNA序列,对该基因进行同源克隆、生物信息学分析,并构建原核表达载体、转化大肠杆菌、进行原核表达和组织特异性表达分析,以探讨川西獐牙菜裂环烯醚萜合成途径中关键酶7-脱氧马钱子酸羟化酶(SmDL7H)基因的功能,为研究裂环烯醚萜类化合物合成途径奠定基础。结果表明:(1)成功克隆了川西獐牙菜SmDL 7 H基因(GenBank登录号为MH243070);SmDL 7 H基因开放阅读框为1 554 bp,编码517个氨基酸,相对分子质量为59.5 kD,等电点9.02;生物信息学预测SmDL 7 H基因编码蛋白无信号肽。(2)多序列比对及进化树分析显示,SmDL 7 H编码的蛋白与滇龙胆、长春花、金银花等植物的DL 7 H基因编码的蛋白具有较高相似性。(3)将SmDL 7 H基因连接到pET-28a原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用0.1 mol/L IPTG于25℃诱导12 h,原核表达分析发现在59.5 kD处有目的蛋白出现,表明与之前预测的蛋白大小一致。(4)荧光定量PCR分析显示,SmDL 7 H基因在川西獐牙菜叶、茎、花、根、愈伤组织中均有表达,其中在叶片中表达量最高,在根中表达量最低。
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